Fastin™ Elastin Assay (Biocolor F2000) 彈性蛋白檢測技術指南

——精準定量組織與細胞外基質中彈性蛋白的黃金標準

一、檢測原理與產品優勢

1.1 特異性結合機制

五肽重復序列靶向：

染料特異性結合彈性蛋白特征性 GXXPG 結構域（X為疏水氨基酸）

不識別膠原或纖維連接蛋白（交叉反應＜0.1%）

比色法檢測：

形成紫紅色復合物（λmax=513nm），動態范圍 0.2-50 μg

1.2 性能參數對比

參數Fastin™ F2000傳統ELISA法組織化學染色

檢測時間1.5小時4-6小時定性分析

靈敏度0.1 μg1 μgN/A

樣本需求量10 mg組織50 mg組織5 μm切片

數據輸出定量（μg/mg）半定量圖像分析

1.3 適用樣本類型

推薦樣本：

? 皮膚/血管/肺組織勻漿

? 細胞外基質（ECM）提取物

? 疾病模型（如動脈粥樣硬化斑塊）

二、標準化實驗流程

2.1 樣本前處理

組織裂解方案：

復制

1. 液氮研磨至粉末狀

2. 加入0.25M草酸銨（試劑盒提供），95℃加熱2小時

3. 12,000g離心10分鐘，取上清檢測

細胞ECM提取：

用含 10mM EDTA 的PBS輕柔刮取培養皿底層

2.2 檢測步驟

復制

1. 標準品制備：0, 2, 5, 10, 20, 50 μg/mL梯度

2. 樣本/標準品各100 μL + 染料試劑50 μL

3. 37℃振蕩孵育90分鐘（避光）

4. 離心沉淀復合物，去上清

5. 染料釋放劑500 μL重懸，測OD513nm

三、數據解讀與優化

3.1 標準曲線示例

彈性蛋白(μg)OD513nm（均值）

00.012

50.305

100.642

201.218

擬合方程：y=0.061x + 0.015（R2=0.998）

3.2 質量控標準

空白值：OD513nm＜0.05

重復性：批內CV＜8%（n=3）

3.3 問題排查指南

現象可能原因優化方案

標準曲線線性差染料未充分溶解37℃預熱試劑10分鐘

樣本值超出范圍延長加熱至3小時

背景值高增加離心至15,000g

四、技術問答（Q&A）

Q1：能否檢測彈性蛋白降解產物？

需改用 Fastin™ Elastin Degradation Kit（Cat. F2200）檢測可溶性片段

Q2：與天狼星紅染色的相關性？

定量結果與 Verhoeff染色 顯著相關（r=0.91, p＜0.001），但與天狼星紅無直接可比性